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摘要：本研究旨在通過基因打靶技術(shù)，構(gòu)建牛朊蛋白基因prnp的敲除載體，并轉(zhuǎn)染牛胎兒成纖維細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)prnp基因的高效敲除。利用正負(fù)篩選策略富集中靶細(xì)胞，最終獲得了9個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞克隆。本研究為生產(chǎn)抗瘋牛病的轉(zhuǎn)基因牛提供了理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。引言：朊蛋白（Prionprotein）是動(dòng)物傳染性海綿狀腦病的致病蛋白，由prnp基因編碼的一種糖蛋白。在牛中，這種病癥被稱為瘋牛?。˙SE），是一種嚴(yán)重危害人類健康和世界經(jīng)濟(jì)發(fā)展的傳染性疾病。瘋牛病的病原體是PrPsc，一種內(nèi)源性膜錨定蛋白...
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摘要：本文探討了聚凝胺（Polybrene）在提升慢病毒轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞效率中的作用。通過詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施，發(fā)現(xiàn)聚凝胺能顯著增強(qiáng)病毒顆粒與樹突狀細(xì)胞的結(jié)合，從而提高轉(zhuǎn)染效率。本研究為基因功能研究和基因治療提供了新的策略，具有廣闊的應(yīng)用前景。引言：基因轉(zhuǎn)染技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中占據(jù)重要地位，尤其在基因功能研究和基因治療領(lǐng)域。慢病毒載體因其高效、穩(wěn)定的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。然而，樹突狀細(xì)胞（DendriticCells,DCs）作為重要的免疫細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率一直較低，限制了...
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引言內(nèi)耳疾病，如感音神經(jīng)性耳聾和梅尼埃病等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量?；蛑委熥鳛橐环N新興的治療手段，在內(nèi)耳疾病的治療中展現(xiàn)出巨大潛力。然而，內(nèi)耳結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和對(duì)損傷的高度敏感性，使得基因遞送成為一大挑戰(zhàn)。慢病毒載體因其高效、持久的基因表達(dá)能力，成為內(nèi)耳基因治療研究的工具。小鼠耳蝸鼓室內(nèi)注射是常用的內(nèi)耳基因遞送方法之一，但轉(zhuǎn)染效率往往受到多種因素的影響。因此，優(yōu)化小鼠耳蝸鼓室內(nèi)慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，提高轉(zhuǎn)染效率和安全性，對(duì)于推動(dòng)內(nèi)耳基因治療的發(fā)展具有重要意義。構(gòu)建慢病毒轉(zhuǎn)染內(nèi)耳疾病的...
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引言：SARS（嚴(yán)重急性呼吸綜合征）冠狀病毒是一種高傳染性的病原體，自2002年底爆發(fā)以來，對(duì)全球公共衛(wèi)生構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。SARS-CoV的S蛋白不僅是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，還在病毒與宿主細(xì)胞表面受體結(jié)合及介導(dǎo)膜融合進(jìn)入細(xì)胞的過程中起關(guān)鍵性作用。因此，S蛋白成為SARS疫苗研究的主要靶點(diǎn)。裂殖酵母作為一種非常有前景的外源基因表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)的外源蛋白更接近其天然特性，是分子生物學(xué)研究中的重要工具。本研究旨在構(gòu)建SARS-CoVS蛋白在裂殖酵母中的表達(dá)體系，為進(jìn)一步研究新一代SAR...
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引言外源基因?qū)氩溉閯?dòng)物細(xì)胞是基因功能研究、基因治療及細(xì)胞工程等領(lǐng)域的關(guān)鍵技術(shù)。高效、安全的基因轉(zhuǎn)移方法對(duì)于實(shí)現(xiàn)外源基因在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定表達(dá)至關(guān)重要。傳統(tǒng)方法如脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染、病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)等雖各有優(yōu)勢(shì)，但存在細(xì)胞毒性大、操作復(fù)雜或安全性隱患等問題。電穿孔法作為一種物理轉(zhuǎn)染技術(shù)，通過短暫施加高壓電場(chǎng)使細(xì)胞膜形成微小孔洞，允許外源DNA進(jìn)入細(xì)胞，具有操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣及可大規(guī)模應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)。然而，電穿孔過程對(duì)細(xì)胞損傷較大，轉(zhuǎn)化效率與細(xì)胞存活率往往難以平衡，限制了其廣泛應(yīng)用。構(gòu)建高效...
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摘要：本文詳細(xì)闡述了大豆矮桿導(dǎo)入系的外源片段剖析及基因定位研究，通過繪制圖示基因型方法分析了含有矮桿基因S的片段導(dǎo)入系，共檢測(cè)到100個(gè)導(dǎo)入片段，確定了多個(gè)與矮桿基因密切相關(guān)的位點(diǎn)。本研究為進(jìn)一步研究大豆矮桿基因提供了重要基礎(chǔ)，對(duì)大豆育種具有重要意義。引言：大豆（Glycinemax）作為重要的糧油兼用作物，在全球范圍內(nèi)廣泛種植。大豆種子富含蛋白質(zhì)和植物油，對(duì)人類飲食和健康具有重要作用。然而，傳統(tǒng)大豆品種生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、植株高大，給管理和收割帶來不便。因此，培育矮桿大豆品種成為大...
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摘要本研究旨在探索電穿孔介導(dǎo)睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（CNTF）基因轉(zhuǎn)染在延緩失神經(jīng)骨骼肌方面的療效。通過構(gòu)建CNTF基因轉(zhuǎn)化體系，采用某品牌電穿孔儀對(duì)SD大鼠進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染，觀察其對(duì)骨骼肌的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，電穿孔介導(dǎo)CNTF基因轉(zhuǎn)染可顯著延緩失神經(jīng)骨骼肌進(jìn)程，為神經(jīng)肌肉疾病的治療提供新的策略。引言神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（NTFs）作為一類具有促進(jìn)和維持神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)、存活和分化的特異性蛋白質(zhì)，為神經(jīng)修復(fù)治療帶來了新的希望。睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（CNTF）是NTFs中的重要成員，具有廣泛的生理...
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摘要：本研究旨在聯(lián)合運(yùn)用陽(yáng)離子多聚物PEI和方波電穿孔兩種不同機(jī)制的轉(zhuǎn)染手段，以期克服精子難轉(zhuǎn)染的問題。通過形成穩(wěn)定復(fù)合物、吸附細(xì)胞表面、胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞、內(nèi)涵體逃逸與DNA釋放等步驟，實(shí)現(xiàn)了對(duì)小鼠精子的高效核內(nèi)轉(zhuǎn)染，為精子載體法在大動(dòng)物中的應(yīng)用提供了成功的模式。引言精子載體法是一種以精子為載體，利用精子與卵子結(jié)合的過程將外源基因帶入受精卵中形成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法。該法無需專門的大型設(shè)備和技術(shù)，簡(jiǎn)單便捷，應(yīng)用廣泛，尤其對(duì)于豬、牛、羊等大動(dòng)物更有方法學(xué)上的優(yōu)勢(shì)，科學(xué)界一直寄厚望于...
