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核酸雜交(Nucleicacidhybridization)，又稱核酸分子雜交。威尼德分子雜交儀原理：是核酸變性和復性理論。雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開形成單鏈，當理化因素消除后，具一定同源性的兩條(探針和待測核苷酸序列)單鏈在適宜的溫度及離子強度條件下，可按堿基互補配對原則特異性地復性形成雙鏈。核酸分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的二條單鏈之間進行。分類：核酸分子雜交按作用環(huán)境不同分為固相核酸分子雜交和液相核酸分子雜交。一、固相核酸分...

硝酸纖維素膜(nitrocellulosefiltermembrane，簡稱NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，雜交技術有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術目前較為常用，先將待測核酸結合到一定的固相支持物上，再與液相中的標記探針進行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有...

Q1:PVDF膜和硝酸膜結合蛋白的原理是什么？A1:一般而言，硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質相聯(lián)，若反復洗幾次后，蛋白容易掉下來，效果較差。尼龍膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合（注：常用的PVDF膜即帶正電荷的尼龍膜），同時也有疏水作用，但相對較弱。這樣的話，PVDF膜和蛋白接合較牢，不易脫落，效果較好。Q2:做組織樣品的westernblot的時候，處理樣品有什么訣竅？A2:必須進行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低...

經(jīng)典實驗步驟是將提取的蛋白電泳—轉膜---一抗孵育---二抗孵育---底物顯色---分析。我這幾天幾乎都在重復著這個過程，現(xiàn)在將自己試驗過程記錄下來，和大家一起分享，希望對新手有所幫助。1.蛋白提取傳統(tǒng)方法是(1)組織稱重(2)利用液氮、研缽粉碎組織塊(3)加入RIPA緩沖液，PMSF(4)勻漿（15,000轉/分*1分鐘）維持4℃(5)加入PMSF冰上孵育30分鐘，移入離心管4℃離心15分鐘(6)上清液為細胞裂解液可分裝-20℃保存。一部分進行Bradford比色法測定蛋白...

紫外線是指通過棱鏡將自然光分成赤、橙、黃、綠、青、藍、紫七色光,波長較紫色光更短的一類光線的總稱．它廣泛存在于自然界中,與人的生活密切相關。根據(jù)生物效應的不同,將紫外線按照波長劃分為四個部分:A波段(UVA),又稱為黑斑效應紫外線(400～315nm);B波段(UVB),又稱為紅斑效應紫外線(315～280nm);C波段(UVC),又稱為滅菌紫外線(280～100nm);D波段(UVD),又稱為真空紫外線(VacuumeUV)(200～10nm)。很多年之前，紫外線就已被用于...

威尼德紫外交聯(lián)儀：在Northernblotting、Southernblotting、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯(lián)、Sterilization(滅菌)、DNANicking(DNA缺失)的應用。紫外交聯(lián)技術是一種常用于材料科學和化學領域的重要技術手段。隨著材料研究的不斷深入，紫外交聯(lián)儀逐漸成為了廣泛應用的分析設備。紫外交聯(lián)儀利用紫外光對材料進行照射，通過能量的輸入和材料分子之間的相互作用，實現(xiàn)材料的共價鍵形成或斷裂。當紫外光照射在材料上時，光能激發(fā)材料內部的電子，使...